支原體檢測(cè)的常規(guī)方法

DAPI染色

在細(xì)胞培養(yǎng)物中檢測(cè)支原體的一個(gè)流行應(yīng)用是用 DAPI（4',6-二脒基-2-苯基吲哚）染色細(xì)胞。DAPI 強(qiáng)烈嵌入 DNA 的小溝中，并在紫外線激發(fā)下在最大 460 nm 處顯示出相對(duì)較寬的熒光發(fā)射。在無(wú)支原體細(xì)胞培養(yǎng)中，僅標(biāo)記細(xì)胞核。如果存在支原體細(xì)胞，它們的 DNA 也會(huì)被標(biāo)記。由于它們的體積小，單個(gè)支原體細(xì)胞無(wú)法在熒光顯微鏡下分辨：只有高度污染會(huì)導(dǎo)致可見(jiàn)的模糊面紗形成，這可能無(wú)法清楚地識(shí)別。

聚合酶鏈反應(yīng)

更靈敏的支原體檢測(cè)方法是 PCR。可以在非常早期的污染和低濃度狀態(tài)下檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)物中的支原體。這種檢測(cè)方法通常適用于細(xì)胞培養(yǎng)工作。

其他

雖然 ELISA 測(cè)試經(jīng)常用于支原體的常規(guī)檢測(cè)，但這種方法在靈敏度和特異性方面并不優(yōu)于 DAPI 測(cè)試。另一種方法是電子顯微鏡，然而，它需要先進(jìn)的設(shè)備并且更耗時(shí)。

結(jié)論

為確保細(xì)胞培養(yǎng)物中支原體污染引起的諸多問(wèn)題最終成為過(guò)去，Biontex 提供了一系列基于 PCR 的檢測(cè)支原體檢測(cè)試劑盒：
MycoSPY®（常規(guī) PCR 檢測(cè)試劑盒）
MycoSPY® Master Mix（ PCR 檢測(cè)試劑盒，包括 Master Mix 和用于凝膠電泳的上樣緩沖液和示蹤染料

該產(chǎn)品對(duì)已建立的細(xì)胞系和原代細(xì)胞均取得了優(yōu)異的結(jié)果。

MycoSPY® 和 DAPI 染色在支原體檢測(cè)中的比較

用 DAPI 染色的 Cos7 細(xì)胞，無(wú) 支原體污染。只有 細(xì)胞核被染色。	DAPI 染色未能揭示 這些 HepG2 細(xì)胞的支原體污染。
當(dāng)存在* 水平的支原體污染時(shí)，這些 DAPI 染色的 H441-Luc 細(xì)胞僅在細(xì)胞外圍 顯示出微弱的可識(shí)別顏色 。	所有這三種 細(xì)胞系的可靠證據(jù)僅由 MycoSPY® 提供。 500 bp 條帶顯示 了支原體污染的明確證據(jù)。 在 大量污染的情況下（第 3 道），無(wú)法再檢測(cè)到 700 bp 的內(nèi)部對(duì)照。

從受污染的細(xì)胞培養(yǎng)物中清除支原體

對(duì)于被細(xì)菌污染的細(xì)胞培養(yǎng)物的處理，通常使用標(biāo)準(zhǔn)抗生素。但是作用于細(xì)胞壁的抗生素（如青霉素）對(duì)支原體無(wú)效。
因此，我們提供產(chǎn)品MycoRAZOR®，這是一種抗生素混合物，可損害蛋白質(zhì)生物合成（轉(zhuǎn)錄和翻譯）。