viennalab IL28B RealFast檢測產品

IL28B RealFast™ Assay

該IL28B RealFast™檢測有助于預測抗病毒治療和丙型肝炎病毒（HCV）感染患者持續病毒學應答（SVR）的成功。

HCV治療的效率

• 聚乙二醇化干擾素/利巴韋林（pegIFN / RBV）療法通常用于治療HCV感染
• SVR取決于病毒基因型，還取決于患者的因素，包括遺傳多態性
• IFNL4基因中的rs368234815 TT>ΔG變異是預測HCV清除率的已知強宿主因子
• rs368234815 TT>ΔG的基因分型有助于預測pegIFN / RBV治療的結果，而與患者種族無關

產品詳情

IL28B RealFast™檢測

7-200 7-203

一。預期用途

IL28B RealFast™檢測是一種快速、準確的實時PCR檢測方法，用于檢測

人干擾素lambda 4（ifnl4）基因/假基因，位于白細胞介素28b（il28b）基因上游。遺傳

有助于預測丙型肝炎病毒（HCV）感染患者的治療反應，這些患者正在考慮接受聚乙二醇干擾素/利巴韋林（PEGIFN/RBV）治療。有利tt等位基因的純合攜帶者傾向于高達3倍

持續病毒學應答（SVR）比∏G等位基因攜帶者。在人類DNA提取液中，定性分析鑒別出

可能與高（TT/TT）或低（TT/△G和△G/△G）治療相關的IFNL4 TT>ΔG基因型——誘導或自發清除HCV。

參考序列：HGVS:NG U 042193.1:G.1457 U 1458;Delaainsc；NCBI DBSNP:RS368234815。

2.介紹

慢性丙型肝炎病毒感染影響了大約3%的世界人口，是肝硬化、肝癌和肝移植的主要原因。

推薦的pegifn/rbv標準療法的成功與否取決于病毒和宿主因素?；颊吒腥静焕?/p>

1型或4型hcv的svr低于2型或3型hcv感染者。影響治療反應的宿主因素包括年齡、性別

影響抗病毒活性的種族和遺傳多態性。ifnl4 rs368234815 t t>.-g變體與rs12979860 c>t緊密相關，

長期治療成功的標志。幾項研究表明rs368234815是il28b的功能變異

mrna調節，與rs12979860相比，作為svr和hcv清除的更好預測因子，尤其是在非洲患者中

祖先。IFNL4基因型TT/TT有利于HCV患者自發和治療誘導的病毒清除，主要是在那些

感染1型或4型。

三。套件內含物100/32 RXN

realfast™2x基因分型混合物1瓶白色瓶蓋1000/320微升

IL28B分析混合物1瓶紫色瓶蓋550/550微升

IL28B TT/TT對照品1瓶綠蓋75/75微升

IL28B∏g/∏g-對照品1瓶紅蓋75/75微升

該試劑盒包含終體積為20微升的100/32反應試劑

每一個。

realfast™2x基因分型混合物包括hotstart taq

優化緩沖體系中的dna聚合酶和dntps。IL28B分析混合物由IFNL4基因特異性引物和兩個等位基因特異性雙標記水解探針組成。

試劑盒中提供了代表il28b tt/tt和∏g/∏g基因型的對照品。

四。儲存和穩定性

IL28B RealFast™分析用冷卻塊裝運。到達后，將試劑盒保存在-20°C。或者，將試劑盒保存在2到8°C，以便在

一個月。該試劑盒可承受20次冷凍/解凍循環，且無活性損失。避免長時間暴露在強光下。如果存儲正確，

試劑盒將保持完整的活性，直到標簽上標明的有效期為止。5個。產品描述

5.1。試驗原理

該試驗基于熒光5'核酸酶分析，也稱為Taqman®分析。每個反應都包含一對基因特異性引物

它放大了ifnl4基因的110bp片段，以及兩個雙標記的等位基因特異性水解探針

擴增片段的序列。5’熒光探針和3’-猝滅染料在完整探針上的接近阻止了記者

從熒光中。在聚合酶鏈反應的延伸階段，taq dna聚合酶的5'-3'外切酶活性能裂解5'-熒光

雜交探測器的記者。熒光團與猝滅染料的物理分離實時產生熒光信號，熒光信號與累積的pcr產物成正比。

在純合tt/tt樣本中，hex標記的tt探針與基因片段的互補鏈雜交。強壯的

在hex通道（556nm）中檢測到熒光信號，在fam通道（520nm）中沒有或僅檢測到基線信號。反之亦然，在

純合子∏g/∏g樣本fam標記的∏g探針與基因片段結合。fam中檢測到強熒光信號

在十六進制通道中沒有或只有一個基線信號。在雜合子樣本中（TT/△G），兩個探針都與擴增子結合，并且

在兩個通道中生成中間信號。

5.2。實時PCR儀器兼容性

IL28B RealFast™分析經驗證可與AB 7500快速儀器一起使用。

該試劑盒與能夠記錄FAM和HEX熒光的各種通用實時PCR儀器兼容：

使用AB StepOne™時，將被動參考染料設置為“Rox”！提供的套件不含ROX。用于需要高rox的實時pcr儀器，用于數據的標準化（例如

Biosystems®儀器：StepOne™，7300，7900/7900ht），在2X基因分型混合物中添加終濃度為1μm的RoX。

5.3條。分析性能規范

il28b realfast™分析和檢測高度連鎖rs12979860 c>t多態性的參考試劑盒顯示99,4%

84份樣品基因分型結果的一致性。

在168個等位基因中，IL28B realfast™分析鑒定出113個有利TT和55個不利∏G等位基因，而參考試劑盒鑒定出

114個有利c等位基因和54個不利t等位基因。對一個不一致的樣本進行測序后發現，存在∏g等位基因，但不存在

與一條染色體上的rs12979860 t等位基因相關。

IL28B RealFast™檢測的敏感性和特異性分別顯示真陽性和真陰性。

檢測限：0.2ng基因組dna（每次反應）。建議DNA濃度：2至20 ng/μL基因組DNA。6.需要但未提供的材料

帶FAM（520 nm）和HEX（556 nm）過濾器的實時PCR儀器，儀器兼容的反應容器，一次性無粉末

手套、渦流器、2.0毫升試管的微型離心機、試管架、一套校準的微量移液管（0.5–1000微升）、帶氣溶膠屏障的無菌針頭

過濾器，分子級水，DNA提取系統，冷凍柜，生物危害廢物容器。