genebridges K003說明書 

BAC Subcloning Kit

BAC亞克隆試劑盒

用于從BAC和粘粒亞克隆DNA片段

• ID：K003

特征

• 不需要限制站點(diǎn)

• 高20 kb的碎片可以亞克隆

• 高紅/ ET效率

• 重組后方便地去除Red / ET重組蛋白表達(dá)質(zhì)粒pRedET。

應(yīng)用

• Basepair將來自BAC的DNA片段亞克隆到高拷貝質(zhì)粒骨架中

描述

可以包含大插入物的大腸桿菌載體，例如細(xì)菌人工染色體（BAC），為功能基因組學(xué)提供了若干優(yōu)勢。它們可攜帶足夠的DNA以包含大多數(shù)真核基因，包括所有順式作用調(diào)節(jié)元件，以及許多真核基因簇，原核調(diào)節(jié)子和許多完整的病毒基因組，在單個(gè)分子中。然而，常規(guī)克隆方法依賴于使用限制酶和體外純化步驟，這阻礙了大分子的工程化。因此，這種分子的有用性直到近才受到限制。

BAC亞克隆試劑盒旨在通過Red / ET重組從任何類型的細(xì)菌人工染色體（BAC）有效地將高達(dá)20kb的大DNA片段亞克隆到質(zhì)粒載體中。

紅色/ ET重組（重組工程）是允許設(shè)計(jì)任何大小的DNA分子的方法，包括非常大的DNA分子，如BAC或大腸桿菌染色體。它依賴于在體內(nèi)同源重組的大腸桿菌，并允許范圍廣泛的具有DNA分子修飾在任何選定的位置上。

內(nèi)容

• 紅/ ET重組蛋白表達(dá)質(zhì)粒pRed / ET，任何大腸桿菌菌株均可通過該質(zhì)粒轉(zhuǎn)化而成為Red / ET精通

• 攜帶ColE1復(fù)制起點(diǎn)加上氨芐青霉素抗性基因的線性載體用于亞克隆實(shí)驗(yàn)

• 陽性對照將來自對照BAC的15kb片段亞克隆到用試劑盒遞送的載體中

• 詳細(xì)的方案，質(zhì)粒描述，圖譜和序列

Sequences

ColE1-amp minimal vector

amp^R ColE1 ORI

GCTCTCCTGAGTAGGACAAATCCGCCGGGAGCGGATTTGAACGTTGCGAAGCAAC GGCCCGGAGGGTGGCGGGCAGGACGCCCGCCATAAACTGCCAGGCATCAAATTAA GCAGAAGGCCATCCTGACGGATGGCCTTTTTGCGTTTCTACAAACTCTTTTGTTT ATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCTCATGAGACAATAACCCTGATAA ATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGTATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCG CCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAAC GCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATC GAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTT TTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTGT TGACGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTG GTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAAGAG AATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCT GACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGAT CATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCATACCAAACG ACGAGCGTGACACCACGATGCCTGTAGCAATGGCAACAACGTTGCGCAAACTATT AACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAG GCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTA TTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACT GGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAG GCAACTATGGATGAACGAAATAGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTA AGCATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTTACG CGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCAGCGTGAC CGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTT CTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGGGGGCTCCCTTTAG GGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCCAAAAAACTTGATTTGGGTGA TGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGATAGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTG GAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGACTCTTGTTCCAAACTTGAACAACACTCAACC CTATCTCGGGCTATTCTTTTGATTTATAAGGGATTTTGCCGATTTCGGCCTATTG GTTAAAAAATGAGCTGATTTAACAAAAATTTAACGCGAATTTTAACAAAATATTA ACGTTTACAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACC AAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGA TCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAAC AAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACT CTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTC TAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATA CCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGT CTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCT GAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACT GAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAG GCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGC TTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTG ACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAAC GCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACA TGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGA GTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGC GAGGAAGCGGAAGAGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTA TTTCACACCGCATAGGGTCATGGCTGCGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGAC GCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGT