TGR BioSciences Pty Ltd（TGR）是一家位于澳大利亞阿德萊德的私營公司。TGR成立于2001年，致力于為基于細胞的研究應用提供創新解決方案。我們的科學家擁有細胞生物學，生物化學和免疫測定設計方面的專業知識，并開發出高質量的產品和服務，這些產品和服務已成功應用于世界各地的藥物發現計劃。

TGR在其研發方面投入了大量資金，我們通過不斷提供新的細胞檢測方法來支持客戶的研究工作，以檢測疾病所依賴的細胞過程。TGR致力于營造持續學習和改進的氛圍，以及高質量的技術支持，為我們的客戶提供性能的產品。

為此，TGR憑借其獲得專項的CaptSure™技術為其核心產品奠定了基礎。這種創新的抗體固定系統提供了更快速，更簡單的免疫測定，以及顯著降低制造成本的好處。此外，我們開發了CaptSure™Multiplex，用于分析單個樣品中的多個目標。除了在自己的產品中使用CaptSure™之外，TGR還與其他公司合作，根據許可安排訪問該技術。

我們的旗艦免疫檢測系列SureFire®是一系列用于分析細胞磷蛋白的檢測試劑盒，由我們位于阿德萊德的工廠生產。SureFire和SureFire Ultra試劑盒通過PerkinElmer，Inc。（美國）分銷，PerkinElmer，Inc。是實驗室試劑的市場領先者。SureFire和SureFire Ultra檢測器目前提供100多種SureFire試劑盒，可提供的工具箱，用于以均質形式測量內源性信號蛋白。

TGR的ELISAONE™是一種高靈敏度的免疫分析技術，無需標準ELISA應用所需的所有處理步驟即可提供快速結果。ELISAONE還為該平臺帶來了靈活性，允許用戶使用標準讀板器在單個96孔板上測量多個靶標。ELISAONE代表ELISA技術的下一代產品，現已通過我們的分銷合作伙伴在美國和加拿大銷售。

AlphaSureFire®Ultra™Multiplex

與PerkinElmer合作，我們自豪地推出AlphaSureFire®Ultra™ Multiplex檢測產品組合，這是僅可用的磷脂蛋白多路檢測平臺，具有真正的同質性和高通量。雖然初的多重測定引入（MPSU試劑盒）僅??包括用于測量磷酸化和總ERK或AKT蛋白的幾個試劑盒，但是多重化試劑組的新添加允許從銪和一組銪中選擇單個磷酸化靶標。基于鋱的單獨試劑并根據需要組合。這種拾取和包裝功能允許科學家選擇感興趣的雙重目標，以便在實驗室中輕松實施。

Alpha SureFire Ultra Multiplex檢測分為兩類（1）Multiplex SureFire Ultra（MPSU）試劑盒和（2）Terbium SureFire Ultra（TBSU）試劑盒。MPSU試劑盒是用于磷酸化和*檢測相同靶標的完整試劑盒，而TBSU試劑盒測量單個磷蛋白靶標，并且旨在與標準AlphaLISA SureFire Ultra試劑盒（ALSU）組合以評估第二個靶標。TBSU試劑盒允許在測定列表中對任何兩種磷蛋白靶標進行拾取和包裝組合，提供兩種獨立靶標的測量，具有大的選擇靈活性。TBSU試劑盒將通過鋱（Tb）受體珠報告目標，而ALSU試劑盒通過銪（Eu）AlphaLISA受體珠報告。

分析原則

阿爾法  神火 ®  超 ™多重磷酸+總測定試劑盒和磷酸+磷酸測定試劑盒（剛剛發布）允許快速，靈敏，和定量地檢測從細胞中磷酸化的，具有相同的蛋白質或總量的測量組合第二種磷蛋白。該Alpha Multiplex測量在相同的測定板孔中從單個細胞裂解物樣品中進行，并且通過使用兩種類型的Alpha受體珠實現，所述Alpha受體珠在不同波長（545nm和615nm）發射。

如下所示，兩種不同的Alpha受體珠通過與特異性測定抗體的結合報告它們與不同抗原的結合。

單個目標 - Phospho + Total Assay試劑盒（MPSU試劑盒）

Alpha 615（銪）受體珠與靶蛋白上磷酸化位點的抗體直接綴合。Alpha 545（鋱）受體珠子涂有Capt Sure™  試劑，該試劑結合Capt Sure  標記的抗總靶蛋白抗體。Alpha供體珠結合生物素化的抗總靶蛋白抗體。

雙靶分析試劑盒（將ALSU試劑盒與TBSU試劑盒結合使用）

ALSU試劑盒中的Alpha 615（銪）受體珠與Capt Sure TM  試劑抗體綴合至靶蛋白上的位點。TBSU試劑盒中的Alpha 545（鋱）受體珠用新開發的Capt Sure2試劑抗體包被，該抗體結合 第二靶蛋白的Capt Sure2標記的抗靶抗體。Alpha供體珠子結合靶蛋白質1和2的兩種生物素化抗體。

在存在靶蛋白的情況下，抗體使供體和受體珠子緊密接近，使得能夠通過具有Alpha功能的讀板器照射供體珠子時產生α信號。光發射量與樣品中存在的目標蛋白質的量成正比。

Alpha技術消除了對費力技術的需求，例如Western印跡或常規ELISA。它是一種無需洗滌步驟的均相分析，結合較短的孵育時間和出色的重現性（較低的CV％），非常適合機器人自動化。

該測定法使用基于珠子的Alpha技術，并且需要能夠讀取雙發射波長的Alpha技術兼容的讀板器。  

測量磷酸和總蛋白質目標：

用于測量磷酸+總ERK和磷酸+總AKT的MPSU試劑盒現已上市。這些試劑盒包含進行測定的所有試劑。

兩種磷蛋白靶標的測量：

將ALSU套件與TBSU套件組合使用

ALSU試劑盒和TBSU試劑盒分別購買特定的磷酸化靶標，并結合測量所需的duoplex組合。TBSU試劑盒手冊中提供了試劑盒組合的方案。

因此，可以選擇超過900種可能的雙磷蛋白組合用于該靈活系統的測量。這在下圖中示意性地示出。

請聯系PerkinElmer獲取化驗盒詳細信息，AlphaPlex讀數的讀板優化以及當前套件組合的完整詳細信息。

資源

示例數據 - MPSU套件

同時測量每個孔中的p-AKT（Ser473）和總AKT

將MCF-7細胞以200K / mL在200mL MEM + 10％FCS中鋪板過夜。然后用MEM + 1％FBS中不同濃度的渥曼青霉素處理細胞2小時，然后用2.5mg / mL胰島素刺激30分鐘（每種條件n = 3）。將每個孔在100mL  SureFire Ultra 裂解緩沖液中裂解，并使用Alpha SureFire Ultra Multiplex試劑盒同時測定10μL等分試樣的每種裂解物的p-AKT 1/2/3（Ser473）和總AKT1  。

同時測量每個孔中的p-ERK和總ERK

將A431細胞以200K / mL在200mL MEM + 10％FCS中鋪板過夜。然后將細胞血清饑餓2小時，然后用不同濃度的EGF刺激10分鐘（每種條件n = 3）。將每個孔在100mL  SureFire Ultra 裂解緩沖液中裂解，并使用Alpha SureFire Ultra  Multiplex試劑盒同時測定10μL等分試樣的每種裂解物的p-ERK和總ERK  。

示例數據 - 將ALSU套件與TBSU套件組合使用

雙磷蛋白檢測

用抑制劑處理后A431細胞中MEK1和ERK磷酸化的多重分析。 在用抑制劑處理然后刺激后，使用標準ALSU測定試劑盒測量磷酸化MEK1的水平，同時使用TBSU測定試劑盒測量磷酸化ERK水平。

MCF-7細胞中蛋白質磷酸化的多重分析。用mTOR抑制劑雷帕霉素處理細胞，然后用胰島素刺激。通過ALSU和通過TBSU測量的p-AKT 1/2/3（Ser473）水平測量p-p70S6k（Thr389）的水平。

HeLa細胞蛋白磷酸化多重分析及總Cofiin標準化。

用EGF受體抑制劑AG1478預處理或不用EGF處理HeLa細胞。除去培養基，用1X SureFire Ultra裂解緩沖液裂解細胞。通過將用于p-ERK 的AlphaLISA SureFire Ultra（ALSU）測定試劑盒和用于Total Cofilin 的Terbium SureFire Ultra（TBSU）測定試劑盒組合制備多重受體混合物。

已經開發出Total Cofilin TBSU試劑盒，以允許使用ALSU試劑盒測量的所有磷蛋白靶標分析的duoplexed標準化。

TBSU檢測試劑盒清單

AlphaScreen SureFire STAT3 (p-Tyr705) Assay Kit

Phospho-SYK (Tyr525/526) Terbium SureFire Ultra Detection Kit

Phospho-SMAD3 (Ser423/425) Terbium SureFire Ultra Detection Kit

Phospho-p70 S6K (Thr389) Terbium SureFire Ultra Detection Kit

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