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技術文章

Technical articles

當前位置:首頁技術文章Taq-Klenow聚合酶

Taq-Klenow聚合酶

更新時間:2018-07-19點擊次數:1955

 

Molecular Cloning Laboratories(MCLAB)成立于1998年,是為生命科學界提供基因組研究耗材和服務的先進者。

MCLAB提供具有成本效益的消耗品和試劑,專注于代以及新一代測序和DNA段分析。我們提供大量分子生物學相關產品,包括抗體,生化試劑,克隆試劑盒,酶,PCR試劑盒,蛋白質凝膠和溶液等。作為我們自己的制造商,我們可以控制生產流程,并大限度地減少定制和大規模訂單的延遲。它有助于確保我們的客戶獲得高質量和價值。

MCLAB擁有一支由20 多位經驗豐富的科學家組成的團隊,致力于為研究人員提供的服務。我們專注于基因組學領域,擁有DNA測序,發酵,片段分析,分子克隆,過表達,蛋白質純化和蛋白質合成方面的專家。我們采用量身定制的客戶服務方式,讓您有機會定制您的項目,并直接與我們的科學家團隊交流以獲得技術支持。憑借二十多年的經驗,我們才華橫溢,技術的員工致力于為您提供所需的成果。

Taq-Klenow聚合酶

名稱

貓#

尺寸

濃度

Taq酶,克列諾

TT-100

1,250個單位

5 U /μl

Taq酶,克列諾

TT-200

5,000單位

5 U /μl

Taq酶,克列諾

TT-OEM

任何尺寸

 

Taq- Klenow 通過截短其N-末端從全長Taq DNA聚合酶修飾,分子量為61kDa。

描述:
Taq -Klenow 通過截短其N-末端從全長Taq- Klenow 修飾,分子量為61kDa。與常規Taq- Klenow 相比,這種截短形式缺乏5' - > 3'外切核酸酶活性,但更具熱穩定性,并且在PCR擴增中具有更高的保真度。

應用:
- PCR(普通和高通量)
- 引物延伸
- 微陣列分析
- 變性液相色譜(DHPLC)

來源:攜帶來自嗜熱生物Thermus Aquaticus YT-1 的Taq- Klenow基因的
重組大腸桿菌菌株。

供應:
10x Taq PCR Buffer(無dNTP)

提供:
20 mM Tris-HCl 
100 mM NaCl 
1.0 mM DTT 
0.1 mM EDTA 
穩定劑
50%甘油
pH 7.5 @ 25°C 

單位定義:
1單位定義為酶量將在75℃下在30分鐘內將10nmol的dNTP摻入酸不溶性材料中。

PCR指南:
Taq -Klenow是初和常用的PCR酶。Taq酶擅長于從低復雜性模板來源擴增較短(<5kb)的序列,并且在很少或沒有優化反應條件的情況下產生穩健的產率。在使用Taq DSC 2.0 DNA聚合酶設計PCR策略時,請考慮以下指南。

1. DNA模板:盡管通常不需要對PCR模板進行大量純化,但應注意粗制或部分純化的DNA來源,因為處理和化學試劑會對PCR過程產生不利影響。應避免接觸短波紫外線或其他DNA損傷劑,高離子強度,SDS,加載染料和苯酚等清潔劑也應避免接觸。為了防止以前的PCR反應造成污染,請考慮在正壓罩和氣溶膠屏障吸管設置反應。在典型的25個循環PCR中,104個拷貝的靶序列將產生可重復的擴增產物。這相當于大約0.1-1ng / ml(終濃度)的質粒DNA和1-10μg/ ml的基因組DNA。使用較低的DNA濃度通常會產生較少的非特異性產物,

2.引物設計:理想地,寡核苷酸引物長度為15-30個堿基,接近50%G + C,并具有相等的(+/- 3℃)退火溫度。建議使用軟件來檢測自身互補或發夾易發區域,并由一些綜合提供商提供服務。注意,雖然引物的5'末端可能包含未模板序列,但3'末端必須*匹配。反應中典型的寡核苷酸濃度為0.1-0.5μM。

3.鎂:鎂是PCR反應的關鍵組成部分,盡管其濃度可以調節以促進各種效應。通常,1.5-2.0mM Mg 2+靶向,但更高的濃度(高達5mM)可用于以保真度為代價刺激反應的產率。相反的情況也是如此 - 較低的鎂濃度將促進更高保真度的產品,總體擴增產率更低。注意,某些反應組分,特別是模板DNA和寡核苷酸,可能為反應提供螯合劑,這會降低有效的鎂濃度并使反應餓死。

4. dNTP:通常,使用100-200μMdNTP的終濃度,盡管更高的濃度可以刺激產量(特別是對于更長的靶標)并且更低的可以提供保真度的增加。Taq酶DSC 2.0 DNA聚合酶還可以摻入和讀取脫氧尿苷和肌苷,這兩種類似物在某些應用中使用。

5. Taq DSC 2.0聚合酶:典型的是1單位/50μL反應(20U / mL),但可以添加額外的酶以刺激產率。Taq DSC 2.0 DNA聚合酶以大約1-2000個核苷酸/分鐘擴展DNA模板,因此建議每個循環每個kb應提供30-60秒的延伸時間。適當的延伸溫度范圍為68-72°C。因為Taq DSC 2.0 DNA聚合酶利用DNA聚合酶對雙鏈DNA段的天然親和力來促進其熱啟動功能,所以它不需要廣泛的初始變性步驟來激活聚合酶。

典型的50μl反應:
在冰上,準備以下每種主混合物,合并,并置于加熱(至94°C)熱循環儀中:

2x DNA /寡核苷酸主混合物:
1.0μl10mM 
dNTPs1.0μl10μMFrontPrimer 
1.0微升10μM反向引物
1.0微升500納克/微升基因組DNA 
21微升I型水

2X酶/緩沖液預混:
5.0微升10X 的Taq PCR緩沖液(無的dNTP)
0.2微升5單位/微升的Taq DSC 2.0 DNA聚合酶
19.8微升I型水

推薦儲存條件: -20°C

部分產品:

名稱

貨號

尺寸

濃度

大腸桿菌DNA連接酶

EDLA-100

1,000個單位

10,000 U / ml

大腸桿菌DNA連接酶

EDLA-200

5,000個單位

10,000 U / ml

大腸桿菌DNA連接酶

EDLA-OEM

任何尺寸

 

 

APE 1

APE-100

3,750 units

15,000 U/ml

APE 1

APE-200

15,000 units

15,000 U/ml

APE 1

APE-OEM

Any Size

 

 

名稱

貨號

描述

I-5™2X高保真混色

I5HM-100

100次反應(50μl體積)

I-5™2X高保真混色

I5HM-200

500次反應(50μl體積)

I-5™2X高保真混色

I5HM-5000

5,000次反應(50μl體積)

I-5™2X高保真混色

I5HM-25K

25,000次反應(50μl體積)

I-5™2X高保真混色

I5HM-OEM

OEM

名稱

貨號

描述

2x BlueStar™PCR Master Mix

BSPM-100

100次反應(50μl體積)

2x BlueStar™PCR Master Mix

BSPM-200

1,000次反應(50μl體積)

 

名稱

貨號

尺寸

HoTaq DNA聚合酶(熱啟動)

HT-200

500個單位,5 U /μl

HoTaq DNA聚合酶(熱啟動)

HT-205

2,500個單位,5 U /μl

HoTaq DNA聚合酶(熱啟動)

HT-210

5,000單位,5 U /μl

HoTaq DNA聚合酶(熱啟動)

HT-OEM

任何尺寸

名稱

貨號

描述

10 x PBS(磷酸鹽緩沖鹽水)

PBS10-100

500毫升

10 x PBS(磷酸鹽緩沖鹽水)

PBS10-200

1升

10 x PBS(磷酸鹽緩沖鹽水)

PBS10-OEM

OEM

 

 

 

 

 

 

 

名稱

貨號

描述

I-5™Hi-Fi DNA聚合酶

PDP-100

250單位,2.5 U /μl

I-5™Hi-Fi DNA聚合酶

PDP-200

1,250單位,2.5 U /μl

I-5™Hi-Fi DNA聚合酶

PDP-OEM

任何尺寸

 

名稱

貨號

描述

I-5™Hotstart DNA聚合酶

I5HD-100

250單位,2.5 U /μl

I-5™Hotstart DNA聚合酶

I5HD-200

1,250單位,2.5 U /μl

I-5™Hotstart DNA聚合酶

I5HD-OEM

任何尺寸

名稱

貨號

尺寸

濃度

Pfu DNA聚合酶

AD-200

500個單位

2.5 U /μl

Pfu DNA聚合酶

AD-205

1,000個單位

2.5 U /μl

Pfu DNA聚合酶

AD-210

2,500個單位

2.5 U /μl

Pfu DNA聚合酶

AD-OEM

任何尺寸

 

 

名稱

貨號

尺寸

濃度

Taq DNA聚合酶(常規)

TR-100

1,250個單位

5 U /μl

Taq DNA聚合酶(常規)

TR-200

5,000單位

5 U /μl

Taq DNA聚合酶(常規)

TR-OEM

任何尺寸

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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6:我們還是Santa,Advanced Biotechnologies Inc,Athens Research & Technology,bangs,BBInternational,crystalchem,dianova,FD Neurotechnologies,Inc. FormuMax Scientific,Inc, Genebridege, Glycotope Biotechnology GmbH; iduron,Innovative Research of America, Ludger, neuroprobe,omicronbio, Polysciences,prospecbi, QA-BIO,quickzyme,RESEARCH DIETS,INC,sterlitech;sysy,TriLink BioTechnologies,Inc;worthington-biochem,zyagen等幾十家國外公司授權代理。

7:我們還是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等*批發,歡迎合作。

 

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